随着林蛙养殖规模的不断扩大，所需林蛙苗种越来越多，单靠移植天然的林蛙受精卵团、蝌蚪已无法满足养殖的需求。为保证适时提供数量充足、规格整齐、体质健壮、生长迅速的优良品种，必须NWVJ取人工繁殖的方法进行林蛙苗种生产。林蛙人工繁殖生产，有许多优越性：一是林蛙苗种纯；二是饲养管理方便，可以有NWVJ，按需要生产苗种，因地制宜放养，使林蛙产品稳定高产；三是就地自繁自养，避免了苗种长途运输，节约大量人力物力；四是可为当地及周边养殖用户提供亲蛙及苗种，促进林蛙养殖业的发展。所谓林蛙的人工繁殖，目前系指人工的方法，促使雌、雄亲蛙，在人工养殖条件下，达到性成熟，且能NWVJ、抱对、交配、繁殖，从而获得受精卵，并给予一定的人为条件，使爱精卵发育，孵化出苗。因此，林蛙人工繁殖，包括亲蛙选择、运输、强化培育、NWVJ、产卵、受精卵孵化等一系列过程。一、亲蛙选择林蛙苗种质量的好坏，幼、成蛙生长速度的快慢，以及人工繁殖中产卵率、受精率、孵化率、幼蛙成活率的高低，除人的技术和环境因素外，还取决于亲蛙质量的优劣。因此，亲蛙的选择是至关重要的，必须认真对待。（一）亲蛙选择标准1、年龄无论是选捕天然野生的亲蛙，还是从养殖户购买的亲蛙，或是从自养的后备亲蛙中选留亲蛙，都应选择3～4龄，超过6龄的蛙，不宜作亲蛙。2、个体规格雌蛙体长7.5厘米以上、体重50克以上；雄蛙体长6厘米以上、体重40克以上。3、体质健壮体表光滑湿润，分泌物多；无病、无伤，无畸形，外形完整，活力旺盛；品质优良，具有典型林蛙特征的个体。（二）雌、雄蛙鉴别与性比1、雌、雄蛙鉴别正确鉴定林蛙的性别，在亲蛙的选择和实际生产中是十分重要的。除根据林蛙内部结构和生物学特性的差异进行雌、雄鉴别外，林蛙雌、雄外形的区别主要在前肢指上，前肢指上有瘤壮突起（婚垫）者为雄性，无瘤状突起者为雌性。2、雌、雄蛙性比配组雌、雄蛙的性的比配组以1：1为宜，雄蛙的比例不宜过大，过大则出现多雄争一雌现象，影响抱对和排卵及受精，同时也增加了投喂饲料的数量和产生活动空间的竞争，增加养殖成本。（三）选择亲蛙时间亲蛙的选择工作，最好在每年的初春，林蛙抱对产卵之前一个月左右进行。此时，林蛙刚刚结束冬眠，天气凉爽，林蛙的生理活动较弱，新陈代谢水平较低，便于运输，成活率高。而且亲蛙运抵养殖地后，经短期饲养和强化培育，即可进入繁殖。也可在晚秋时，林蛙即将进入冬眠之前，进行亲蛙的选择工作。但运抵养殖地后，要经过一段较长的时间的暂养和漫长的越冬冬眠期，增加了饲养管理的工作量，而且在越冬期间，林蛙对外界环境和温度等的变化及对疾病的抵抗力等都较低，往往存在着部分夭折的危险。在温度较高的5～10月，不宜进行亲蛙的选择和长途运输，此期间林蛙生理活动较旺盛，新陈代谢水平也较高，活动能力强，容易碰撞致死，而且由于气温高，经长途运输易产生各种疾病而导致死亡。二、亲蛙运输由于林蛙的幼、成蛙是用肺呼吸，因此，在运输时可不必象运输受精卵团和蝌蚪那样浸泡在水中，只要能保持一定的湿度，保证透气良好，保持较凉爽的温度即可成功地运输。（一）运输工具NWVJ用木制、铁制、塑料制、纸制的桶或箱均可，内侧衬以光滑柔软的塑料薄膜或布等，桶或箱的侧面和上面要钻多个通气孔洞，注意内衬物不要将通气孔洞堵塞。桶或箱的底部要垫放较厚且浸足了水的海绵泡沫、水草或棉、布等，以保持湿度和减轻运输过程中的震动。由于亲蛙个体较大，活动力也强，为避免碰撞和拥挤叠压致死，最好将动具内分隔成若干个小室，每一室内放2～4只林蛙。幼、成蛙的弹跳能力强，为防止运输途中跳出逃跑，装完箱后，要用湿布或密眼网片封好上口。（二）运输方法1、运输前停食在亲蛙装箱（桶）启运之前的2～3天，要停食，不要投喂饵料，以免运输途中排出粪便造成运具内环境污染，同时可减轻其新陈代谢强度和活动强度，以利运输和提高运输中的成活率。2、运输密度运输密度可按每平方米运具内面积装200～300只，装箱之前，要将蛙体洗干净。三、亲蛙的强化培育培育出一定数量的成熟度好、繁殖力高、体质健壮的优质亲蛙，是林蛙养殖中人工繁殖的决定性物质基础和生产成败的关键。因此，必须对亲蛙进行科学饲养，精心培育，从而达到成熟早、成熟率高和产卵量多的目的。（一）亲蛙培育池亲蛙培育地，是集亲蛙饲养、发育抱对、产卵繁殖于一体的活动场所，故亦称产卵池。其环境的好坏，直接影响亲蛙的性腺发育。因此，面积不宜过小，每个池的面积以20～30平方米为宜，视生产规模可建一个或若干个。为便于饲养管理，便于饲养管理，便于观察抱对产卵和收集受精卵团等，面积较大的池，可建成宽度为4～5米，长度为任意的窄长方形池子，其环境尽可能地接近自然状态。四周或中间要留有占水面积1/3的陆地，陆地上可栽种花草或农作物等作为隐蔽物。池水的深度不必一致，可有深、有浅，从10厘米到40厘米为宜。其中10厘米左右的“浅水”面积和40厘米左右的“深水”面积各占一半为好。如果条件有保证，能维持池水的清新和温度稳定，池水均为10厘米左右的“浅水”也可。池水中可移植一些水稗、水葱、眼子菜、水葫芦等水生植物，以满足林蛙产卵繁殖的环境条件，同时又可净化水质。池子的四周要建有防止亲蛙逃逸的防逃障，共高度为1米以上，防逃障要垂直于地面或稍向内倾斜。其材料可就地取材，用砖墙、土墙、竹木障、铁网、塑料布等均可。（二）亲蛙放养亲蛙的放养密度为每平方米2～3对，雌、雄蛙比例为1：1。如果生产规模较大，亲蛙放养数量多，雄蛙比例可适当少些，以防止雄蛙过多为争夺雌蛙而产生争斗，影响抱对产卵。（三）培育管理亲蛙营养状况的好坏，不仅直接关系到怀卵量和成熟度，而且对受精率、孵化率乃至蝌蚪的成活率及幼蛙的生长等都有潜在的影响。因此，投喂亲蛙的饲料要求营养丰富而全面，饲料品种不可单一，尽可能多喂些动物性活饵。亲蛙在孕育卵期间，对营养的需求量较高，摄食量大，每日投饲量应占其体重的10%左右，其中动物性饵料要占总投饲量的50%～60%为好。每天投喂2次，于早晨天刚亮时和下午日落之前，气温较凉爽时投喂。在亲蛙NWVJ期间及而后的抱对期间，其摄食量明显减少，产完卵后，则进入生殖休眠状态，而完全停止摄食。此期间，要适当减少投饵或停止摄饵，以免费饲料。生殖休眠过后，亲蛙摄食恢复正常，此时要及时投饵，仍需保证饲料的质量和数量，以利于蛙产后体能的恢复，为下一次的繁殖打好基础。在亲蛙饲养管理过程中，要注意调节水温、水质、水位，适时、经常地注入和更换池水，每周换水至少2次，水温保持在18～24摄氏度范围内，不可忽冷忽热。要随时做好防病、除害等工作。四、人工催产在自然条件下，达到性成熟的雌、雄蛙个体，一到繁殖季节，就开始抱对产卵繁殖。但由于亲蛙的成熟度不一，加之气候、环境因素等影响，其抱对产卵的时间则有先有后。因此，不但繁殖时间拖延很长，而且孵化出的蝌蚪规格也参差不齐。为了使亲蛙能够集中抱对产卵，缩短繁殖时间，获得规格整齐的苗种，有必要对亲蛙进行人工催产。（一）亲蛙成熟度的鉴别成熟良好的雌蛙，腹部膨大柔软，对雄蛙NWVJ的鸣叫有明显的反应，并回以低沉的呼应叫声，愿意接近并依恋雄蛙，且喜欢与之在水面聚群追逐嬉戏，不拒绝雄蛙的拥抱。这样的雌蛙，即使不施以人工催产，也能很顺利地产卵。成熟度较差的雌蛙，腹部膨大程度较小，弹性差，对雄蛙不感兴趣，对雄蛙的NWVJ鸣叫无反应，躲避雄蛙的接近，喜单独活动，拒绝雄蛙的拥抱。对这部分亲蛙，必须施以人工催产，才能达到与成熟良好的亲蛙同期产卵的目的。（二）NWVJ物目前使用的NWVJ物，主要有绒毛膜NWVJ（HCG）、促黄体生成素释放激素类似物（LRH-A）及林蛙脑垂体等三种。前两种药物有商品出售，而林蛙脑垂体需使用者自己摘取制备，制备方法为：1、摘取脑垂体取活的成体林蛙（非同种亦可）若干，用剪刀从两侧嘴角剪开至鼓膜后，然后在鼓膜后横着将头剪下；把口腔上颌的皮肤向前翻起，露出头骨，用剪刀从每侧枕骨大孔向眼前方各斜剪一刀；将剪成的三角形骨片向前翻折提起，露出脑的腹面；在脑的视神经交叉处可见到一埋于淋巴组织内的粉红色小体――脑垂体，用尖镊子拨离垂体周围的结缔组织，将脑垂体取出。取出的脑垂体可鲜用，也可用丙酮或无水酒精浸泡脱水脱脂后，干燥存放备用，干燥存放的脑垂体，可保存1～2年时间。2、制备药液把鲜脑垂体或干燥保存的脑垂体，在经过消毒处理的研硒内研细成末或粉状，然后加入适量0.65%的生理盐水制成悬液，沉淀后取其上层清液使用。（三）NWVJ剂量NWVJ物主要用于雌蛙，因雄蛙较雌蛙提前一周左右进入NWVJ期，一般不需要注射药物来促进NWVJ的生成和成熟，但为了促进其NWVJ强度，也可酌情给雄蛙注射相当于雌蛙一半的药量。上述三种药物，可单独使用，也可混合使用，一般混合使用效果会更好些。单独使用时，促黄体生成素释放激素类似物（LRH-A）为30微克/千克体重；绒毛膜促性激素（HCG）为1200国际单位/千克体重；林蛙脑垂体为15～20个/千克体重.由于林蛙体躯较小，注入体内NWVJ水的体种不能太多，所以，NWVJ物的浓度要配高一些，每只亲蛙注入体内NWVJ水的体积以0.5毫升左右为宜。（四）注射方法与效应时间1、注射方法NWVJ用臀部肌肉注射或腹部皮NWVJ射。一般只需注射一次。臀部肌肉注射时，以45度角刺入，进针深度1.5厘米左右。腹部皮NWVJ射时，用镊子夹起肚皮，以水平方向刺入，进针深度2厘米左右。2、注射操作催产注射时最好两人配合操作，一人用双手握住蛙体，一人以右手持注射器，左手拿消毒棉球轻抵注射部位，退针时，左手用棉球轻轻按揉针孔，防止药水外溢。3、效应时间将注射NWVJ物的亲蛙，按1：1性比放入产卵池内。在适宜水温下，催产后的效应时间约为40～48小时，雌、雄亲蛙即开始抱对，继而排卵、排精，完成受精过程。如果超过48小时，仍无抱对现象，则需做第二次NWVJ，第二次NWVJ的药剂用量为第一次的1/2。4、注射后注意保持环境安静NWVJ用人工催产、自然产卵受精的方法，可获得理想的人工繁殖效果。值得注意的是，在亲蛙NWVJ抱对时，应保持环境的安静，否则一旦受到外界的NWVJ，雄蛙就会产生僵直现象，需数分钟才能恢复过来。因此，要严禁人为惊吓，以免影响产卵和受精率。五、人工孵化在自然条件下，野生林蛙的受精卵，由于受天敌的危害和环境及气候等条件的影响，孵化往往很低。而人工孵化，则是在专用的孵化池中进行，避免了各种不利条件的危害和影响，大大地提高了孵化率。（一）孵化池为了能把不同时期产的卵分池孵化，避免因不同时期的卵同池孵化而产生蝌蚪规格参差不齐的现象，孵化池可多建几个，数量依亲蛙数量而定。面积不必太大，一般2～3平方米即可，水深20～３０厘米。为保证水中的溶解氧含量，池水应能保持一定的交换量，但水流不能太大，不可冲动卵团。进出水口都要用筛绢罩上，防止有害昆虫、剑水蚤等充入和受精卵或蝌蚪随水流出。如果条件允许，也可不建孵化池，在大水面中用网箱孵化。网箱面积1平方米左右，箱深40厘米，NWVJ用40目聚乙烯网片固定在框架上制成。孵化时将网箱固定架设在水面上，网箱底部入水深度15厘米左右，精心看护孵化即可。（二）孵化管理1、投放同一批受精卵受精卵团经充分吸水膨胀后，就可以移入孵化池内孵化。同一池内，要投放同一天产出的卵。2、孵化密度每平方米可投放受精卵团10～15团，约8000～15000粒卵。3、水质、水温控制池水要保持微流动和交换，水温保持在18～24摄氏度，切勿超过27摄氏度，否则胚胎或蝌蚪就会被烫死。如果是静水孵化，应每隔6小时更换掉1/4的老水，新注入的水与原池中水的温差，不要超过2摄氏度。4、送卵操作要轻快在从产卵池向孵化池移送受精卵团时，操作要轻快，不可将受精卵团弄散或将卵团上、下面弄颠倒，否则容易降低孵化率甚至导致胚胎死亡。5、做好孵化记录要认真记录温度、水深、入孵时间、入孵卵数、受精率、孵化率、孵出时间等，以便发现问题及时处理和总结经验教训。（三）胚胎发育与变态过程1、胚胎发育据马常夫等观察结果，卵受精后约10～17小时开始分裂（但在水温低的条件下，2～3天才开始分裂），卵受精的第2天，即进入原肠早期，最初形成背唇，出现新月形小沟。第3天进入原肠胚中期，侧唇出现，原口内卷，背唇和侧唇合成半圆弧形。第4天原口内唇向内卷，原口变小，为卵黄栓所堵塞，过渡到原肠胚晚期。第5天出现神经板，以后神经板边缘升起形成褶，中央向内凹，形成神经沟，沟宽约1毫米，胚体长2.4毫米.第5天半神经褶愈合,形成神经管,口吸盘出现,呈裂缝状,鳃亦出现.第6天至第6天半，出现尾芽，长度为胚体长的1/8～1/9，胚体长为2.8毫米。第7天可见外鳃原基，尾长为全长的1/3，胚胎长6.5毫米。此时胚胎脱离卵胶膜，吸附于卵胶膜或水草等物体上。第8天外鳃分出短指状的枝，体长为7.5毫米,尾长为体长的1/2。第9天外鳃生成线状。10天左右蝌蚪口已张开。发育至第12天，体长11毫米，尾长6毫米，腹部短而圆，尾扁而宽，消化管变成弯曲状。第13天鳃盖生成，外鳃消失，体长14毫米，尾长8毫米，消化管迂回弯曲。自此，胚胎发育基本完成，下一步进入发育完善阶段2、变态过程自受精卵发育至第31天，开始出现后肢，体长36毫米，尾长25毫米，消化管异常发达。第35天出现前肢，体短缩为34毫米，尾长21毫米，消化管开始紧缩变小，口内角质板消失。第37天，体长缩短至15毫米，尾缩短至1毫米。此时幼蛙登陆。第38天，尾部全部消失，至此完全变态为幼蛙。

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