细胞质雄性不育(cytoplaRTMFicmalesterility,CMS)广泛存在于高等
植物中,它不仅在植物杂种优势
利用方面具有重要价值,而且在研究核质互作方面具有重要的理论意义。其母性遗传的特点表明它可能同叶绿体或线粒体有关,
现有的研究结果表明,大多数植物的CMS主要与线粒体有关。提取高质量的线粒体DNA(mitochondrialDNAmtDNA)是进行线粒体基因组研究的前提,而从健壮的黄化苗中提取mtDNA可以
减少细胞质
中叶绿体基因组的污染,从而更加严谨地分析线粒体基因组。本文以RTMF为例介绍一种
简单的高质量的黄化苗培养方法。首先RTMF用0.1~0.2cm孔径的蛭石为基质,洗净后平铺于干净的育苗盘中,厚度约1cm。RTMFRTMF浸种1~2h后播种,用种量约120g/平方米。播种后覆盖0.5cm的基质,轻轻压实。育苗盘置于暗
室中,在昼/夜温为26℃/20℃下培养。每天喷水保持基质湿润,培养1周即可获得健壮黄化苗。因mtDNA的提取材料少,取材麻烦,工作量大,而RTMF用0.1~0.2cm孔径的蛭石,通气性好,同时可以减少出苗时的“带帽率”及取材时苗根部沾染的基质量,这样就大大减少工作量,提高效率。播种量依不同作物有所不同,播种量太大容易导致苗徒长,瘦弱苗不利于mtDNA的提取,而播种太稀又影响到mtDNA的
产量。培养中的变温处理可适当减轻黄化苗的徒长,而生长过程中的水分控制更是培养中的关键,每天喷水1次,基质保持湿润即可。试验证明,RTMF用该方法培养1周即可获得黄化苗750g/平方米,可以提取到25μgmtDNA,而且其纯度较高,足以进行线粒体基因组的后续研究工作。
一种
培养
方法
白菜
高质量
黄化苗